目前ELISA試劑盒檢測(cè)的樣本中，除了細(xì)胞上清外，還有比較大的一部分是血清和血漿樣本。對(duì)于ELISA試劑盒客戶來(lái)說(shuō)，在實(shí)驗(yàn)中可能用到不同的樣本，如何辨別所購(gòu)的ELISA試劑盒能否測(cè)手中的樣本呢？對(duì)于zui常見(jiàn)的細(xì)胞上清，我們大家知道，培養(yǎng)細(xì)胞過(guò)程中，無(wú)特別情況一般是10%的牛血清加入培養(yǎng)基中，經(jīng)過(guò)培養(yǎng)后，細(xì)胞的吸收消耗，zui后細(xì)胞上清中蛋白含量會(huì)很少，而且對(duì)于一般牛血清生產(chǎn)的廠家來(lái)說(shuō)，在生產(chǎn)過(guò)程中已經(jīng)去除了，所以對(duì)一般ELISA而言，不會(huì)影響抗體抗原的結(jié)合。
1、如廠家沒(méi)有提供專門用于血清血漿樣本的緩沖液，那么只要用已知濃度的待測(cè)指標(biāo)蛋白加入所測(cè)種屬的血清作為樣本加樣和用已知濃度的待測(cè)指標(biāo)蛋白加入PBS緩沖液中同時(shí)檢測(cè)對(duì)比，ELISA試劑盒即可知道該試劑盒是否可以直接用來(lái)測(cè)血清血漿樣本。
2、如廠家沒(méi)有提供專門用于血清血漿樣本的緩沖液，只是有一個(gè)籠統(tǒng)的或統(tǒng)一的稀釋液，那么只要用已知濃度的待測(cè)指標(biāo)蛋白加入所測(cè)種屬的血清直接加樣和用已知濃度的待測(cè)指標(biāo)蛋白加入廠家提供的統(tǒng)一的緩沖液中同時(shí)檢測(cè)，也可得出該試劑盒是否可直接用來(lái)檢測(cè)血清血漿樣本。
3、如廠家提供專門用于血清血漿樣本的緩沖液，可用已知濃度的待測(cè)指標(biāo)蛋白加入所測(cè)種屬的血清直接加樣和用緩沖液按說(shuō)明書(shū)分別加樣，也可得出結(jié)果。
如該種類型ELISA試劑盒樣本總量如為100μl的話，一般而言，會(huì)是50μl的樣本加樣量和50μl的特定的緩沖液。
在使用試劑盒的過(guò)程，可將已知濃度的蛋白用血清或血漿調(diào)配到試劑盒標(biāo)定的檢測(cè)限的zui高值的2倍，加入50μl做兩孔，一孔補(bǔ)入常規(guī)的50μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液，ELISA試劑盒一孔補(bǔ)入50μl樣本分析緩沖液，即可區(qū)分出效果來(lái)，有時(shí)候，有些廠家為了達(dá)到“消除”的效果，在樣本分析緩沖液中加入待測(cè)目標(biāo)蛋白，為了鑒別出這種情況，也可直接加入樣本分析緩沖液做一孔，同時(shí)做對(duì)比，這樣可試出試劑盒中的針對(duì)血清血漿樣本的緩沖液是否真的有效。
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