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ELISA試劑盒介紹和操作步驟
更新時(shí)間:2019-05-16   點(diǎn)擊次數(shù):2528次

ELISA中有三個(gè)必要的試劑:免疫吸附劑、結(jié)合物和酶的底物等
完整的ELISA試劑盒包含以下各組分:
1.已包被抗原或抗體的固相載體(免疫吸附劑)
2.酶標(biāo)記的抗原或抗體(結(jié)合物);
3.酶的底物;
4.陰性對(duì)照品和陽性對(duì)照品(定性測定中),參考標(biāo)準(zhǔn)品和控制血清(定量測定中);
5.結(jié)合物及標(biāo)本的稀釋液;
6.洗滌液
7.酶反應(yīng)終止液。
 ELISA試劑盒操作步驟:
1. 加標(biāo)準(zhǔn)品:在酶標(biāo)包被板上設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品孔,依次加入不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50ul(建議每個(gè)濃度做2個(gè)平行孔)
2. 加樣:分別設(shè)空白孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上待測樣品孔中先加樣品40μl,然后再加樣品親和素10μl。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻。
3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4. 配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用。
5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。
6. 加酶:除空白孔外每孔加入酶標(biāo)試劑50μl。

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